Простое слепое плацебо-контролируемое рандомизированное исследование безопасности, реактогенности и имунногенности вакцины «ЭпиВакКорона» для профилактики COVID-19 на добровольцах в возрасте 18-60 лет (фаза II)

Резюме Вакцинация населения — одна из наиболее эффективных мер противодействия пандемии, вызванной новой коронавирусной инфекцией. Поэтому ученые всего мира работают над созданием эффективны и безопасных вакцин. Мы разработали синтетическую пептидную вакцину «ЭпиВакКорона» против нового коронавируса SARS-CoV-2, которая представляет собой суспензию для внутримышечного введения, содержащую композицию химически синтезированных пептидных иммуногенов S-белка коронавируса SARS-CoV-2, конъюгированных с белком-носителем, и адсорбируется на гидроксиде алюминия. В настоящее время проводятся I–II фазы клинических испытаний вакцины, которые состоят из двух этапов: этап 1 — открытое исследование безопасности, реактогенности и иммунологической активности вакцины с участием 14 добровольцев в возрасте 18–30 лет, этап 2 — простое слепое сравнительное рандомизированное плацебо- контролируемое исследование с участием 86 добровольцев. В исследовании приняли участие добровольцы в возрасте 18–60 лет, вакцину вводили внутримышечно дважды с интервалом 21 день между инъекциями. Все местные реакции на введение вакцины были умеренными, например кратковременная боль в месте инъекции. Признаков развития местных или системных побочных реакций не было. Схема двухдозовой вакцинации вызвала выработку антител, специфичных к антигенам, из которых состоит вакцина, у 100% добровольцев. Сероконверсия с титром нейтрализующих антител ? 1:20 была зарегистрирована у 100% добровольцев через 21 день после второй дозы иммунизации. В группах добровольцев, вакцинированных плацебо, о сероконверсии не сообщалось. Вакцина «ЭпиВакКорона» на основе пептидов имеет низкую реактогенность, является иммуногенным и безопасным продуктом.

Идентификационный номер клинического исследования: NCT04527575.

Введение

За последние два десятилетия коронавирусы спровоцировали эпидемические вспышки двух респираторных заболеваний: ближневосточный респираторный синдром и тяжёлый острый респираторный синдром [3, 15]. В конце 2019 года в Китае был обнаружен новый тип вируса, способный передаваться от человека к человеку, вызывая вспышку вирусной пневмонии [25]. Возникновение нового коронавируса подтверждает, что заболевания, вызываемые этой группой вирусов, представляют угрозу для всемирного общественного здравоохранения, поскольку в течение короткого периода времени вирус распространился почти по всему миру. 11 марта 2020 года ВОЗ придала новому коронавирусу статус пандемии.

Нынешняя ситуация, связанная с непрекращающейся пандемией COVID-19, ставит вопрос о необходимости оперативной разработки контрмер, среди которых одной из важнейших мер является доступность эффективной и безопасной вакцины [10]. В настоящее время во всем мире ведется разработка профилактических средств против COVID-19 на основе следующих технологических платформ: субъединичных, векторных реплицирующихся и векторных нереплицирующихся, РНК- и ДНК- вакцин; инактивированных, живых ослабленных вакцин и вирусоподобных вакцинх на основе частиц [9]. Мы разработали вакцину "ЭпиВакКорона", содержащую химически синтезированные пептидные иммуногены, соответствующие выбранным защитным эпитопам шиповидного (S) белка коронавируса SARS-CoV-2. Пептиды конъюгированны (пришиты) к рекомбинантному вирусному нуклеокапсидному N-белку-носителю. Гидроксид алюминия используется в качестве адъюванта. В настоящее время проводится I–II фаза клинических испытаний вакцины "ЭпиВакКорона", то есть изучение показателей безопасности, реактогенности и иммуногенности вакцины на добровольцах в возрасте 18-60 лет. В данной статье обобщаются промежуточные результаты исследований.

Основными задачами исследований являются: оценка безопасности вакцины "ЭпиВакКорона" при двукратном внутримышечном введении; оценка реактогенности и побочных реакций на введение вакцины; исследование иммунных реакций после двух доз вакцины "ЭпиВакКорона" в сравнении с плацебо.

Материалы и методы

Дизайн исследования

Исследование проводилось в федеральном государственном учреждении здравоохранения «Медико-санитарной части № 163 Федерального медико-биологического агентства» (ФГБУЗ МСЧ-163 ФМБА России).

Первый этап был открытым исследованием. В этом исследовании были задействованы 14 мужчин и женщин в возрасте от 18 до 30 лет включительно, которые соответствуют критериям включения и не имеют критериев исключения, данные которых будут использованы для последующего анализа безопасности и иммуногенности. Второй этап был простым, слепым, плацебо-контролируемым, рандомизированным исследованием на параллельных группах. В исследовании были задействованы 86 мужчин и женщин в возрасте от 18 до 60 лет включительно, которые соответствуют критериям включения и не имеют критериев исключения (Рис. 1). До начала всех процедур исследования от испытуемых было получено письменное информированное согласие на их включение в исследование. Критерии включения: в исследование были включены добровольцы обоего пола с индексом массы тела от 18,5 до 30 кг/м2. При сборе анамнестических данных и данных, основанных на субъективном отчёте, добровольцев не было выявлено хронических заболеваний, серьезных сопутствующих заболеваний, патологий или острых инфекционных заболеваний. Данных о положительном аллергическом анамнезе или непереносимости препарата не поступало. В течение исследуемого периода, а также за 7 недель и менее до иммунизации добровольцы не принимали никаких препаратов, влияющих на параметры иммунной системы. На этапе скрининга у добровольцев не было выявлено отклонений в жизненно важных параметрах (артериальное давление, ЧСС, ЧД, температура тела). При тестировании образцов сыворотки крови добровольцев на наличие антигена к гепатиту В (HBsAg), антител к ВИЧ и к гепатиту С, а также на наличие возбудителя сифилиса были получены отрицательные результаты.

Определение антител класса А, М и G, характерных для SARS-CoV-2, проводили методом ИФА. На этапе скрининга антитела, а также РНК коронавируса SARS-CoV-2 отсутствовали в мазках из носоглотки у всех добровольцев.

Критерии исключения были такими: контакты с COVID-19 в течение 14 дней до начала клинического исследования; гиперчувствительность к любому компоненту вакцины и наличие в анамнезе аллергических реакций на любую вакцинацию в прошлом; наличие в анамнезе серьезных поствакцинальных реакций/осложнений; беременность и грудное вскармливание; военнослужащие-призывники; симптомы любого заболевания на момент включения в исследование или если прошло менее 4 недель с момента выздоровления; наличие в анамнезе любого острого респираторного заболевания в течение менее 3 месяцев до включения в исследование; туберкулез, рак, аутоиммунные заболевания, кожные заболевания (пузырчатка, псориаз, экзема, диффузный нейродермит); длительное применение (более 14 дней) иммунодепрессивных препаратов, глюкокортикоидов системного механизма действия или иммуномодуляторов в течение 6 месяцев до исследования; вакцинация любой вакциной в течение одного месяца до включения в исследование; прием иммуноглобулиновых препаратов или препаратов крови в течение последних 3 месяцев до исследования; донорство 450 мл или более крови или плазмы в течение менее 2 месяцев до исследования.; участие в других клинических испытаниях менее чем за 3 месяца до начала исследования; алкогольная или наркотическая зависимость; прием более 10 единиц алкоголя в неделю; положительный тест на ВИЧ, вирусные гепатиты В и С, сифилис; ложное включение (нарушение критериев включения и невключения) или появление критериев невключения во время исследования; исключение в связи с клинически значимым отклонением от протокола/нарушением протокола; и/или отказ добровольца от продолжения исследования.

После получения результатов обследования (анамнез, физический осмотр, лабораторное и томографическое исследование) добровольцы были разделены на группы. На первом этапе исследование проводилось с привлечением 14 добровольцев, включенных в одну группу (1-ая Группа). Вакцина не была защищена кодом. Первому добровольцу вакцина была введена внутримышечно, затем доброволец в течение 72 часов находился под наблюдением (т. е. период остановки); в случае отсутствия осложнений у первого добровольца вакцинировали второго добровольца. Далее последовал период остановки, и через 72 часа вакцина была введена третьему добровольцу; затем через 72 часа — четвертому; и еще через 72 часа — пятому добровольцу. Через семьдесят два (72) часа после вакцинации 5-го добровольца была проведена первая вакцинация оставшихся 9 добровольцев. Через 21 день после первого введения вакцины проводили вторую инъекцию. Второй этап- простое слепое сравнительное рандомизированное плацебо-контролируемое исследование. Восемьдесят шесть (86) добровольцев были разделены на две группы методом блочной рандомизации в соотношении 1:1 (рандомизация по методу “запечатанного конверта”): Группа 2 получила вакцину "ЭпиВакКорона" (43 субъекта); Группа 3 получила плацебо (43 субъекта). За день до первой вакцинации все добровольцы были госпитализированы. Время пребывания в больнице составило 23 дня. Для объективизации исследования добровольцы не знали, какую исследуемый препарат им вводили. Исследуемые препараты доставлялись в испытательный центр в готовом к применению (защищённым кодом) виде. Для обеспечения маскировки перед инъекцией исследуемые препараты были подготовлены в процедурном кабинете за ширмой. Никаких специальных мер по обеспечению выполнения требований для допущения исследуемого препарата не требовалось, поскольку исследуемый препарат был назначен в медицинском учреждении сотрудниками испытательного центра учреждения. Врач-исследователь, открывая конверт с наименьшим номером в наборе, знал, какой рандомизационный номер должен быть назначен и какой препарат исследования должен быть введен добровольцу. Когда в исследование был включен следующий доброволец, был вскрыт следующий конверт.

Первичными критериями эффективности были соотношения вакцинированных добровольцев, у которых не было лабораторно подтвержденных симптомов SARS-CoV-2 в сочетании с одним или несколькими из следующих симптомов: лихорадочное состояние или озноб; кашель; одышка или затрудненное дыхание; усталость; мышечная боль; головная боль; потеря вкуса или запаха; боль в горле; заложенность носа или насморк; тошнота или рвота; диарея в течение 9 месяцев после вакцинации по сравнению с плацебо. Вторичными критериями эффективности были следующие: доля добровольцев с повышением уровня иммунного ответа в виде средних геометрических титров специфических антител в ИФА; и титр специфических нейтрализующих антител ? 1:20 через 42 дня после первой вакцинации и 90, 180 и 270 дней после первой вакцинации по сравнению с плацебо.

Протокол клинического исследования был рассмотрен на заседании местного комитета по этике в ФГБУЗ МСЧ-163 ФМБА России, где проводилось клиническое исследование (протокол заседания от 25 июля 2020 года). Исследование одобрено Советом по этике Министерства здравоохранения Российской Федерации (выписка из протокола заседания Совета по этике № 376 от 24 июля 2020 г.). Исследование проводилось в соответствии с этическими принципами Хельсинкской декларации, первоначально принятой 18-й сессией Всемирной медицинской ассоциации (1964), пересмотренной в 2013 году. В ходе клинического исследования “простое слепое плацебо-контролируемое рандомизированное исследование безопасности, реактогенности и иммуногенности вакцины "ЭпиВакКорона" для профилактики COVID-19 на добровольцах в возрасте 19-60 лет (фаза I-II)” не было внесено никаких изменений в протокол исследования. Все процедуры (физический осмотр, клинические тесты, иммунологическое исследование и выявление нежелательных явлений) проводились в соответствии с Протоколом № COV/pept-01/20 (Версия 2 от 22.07.2020). Исследование началось 26 июля 2020 года и завершится 18 мая 2021 года.

Вакцина и плацебо

Вирусный шиповидный белок S, находящийся на поверхности вириона и образующий гомотримеры, является перспективной мишенью для разработки вакцин против нового коронавируса. Этот белок вируса SARS-CoV-2 состоит из двух субъединиц. Субъединица S1 обеспечивает связывание вируса с рецептором ACE2, расположенным на мембране клетки-хозяина. Субъединица S2 обеспечивает слияние оболочки вириона и мембраны клетки-хозяина. Блокирование функций первой субъединицы, а именно связывания рецептора, а также функции второй субъединицы, обеспечивающей слияние вирусной оболочки и мембраны клетки может обеспечить защиту от вирусной инфекции. Однако разработка вакцин SARS-CoV-2 с использованием полной молекулярной структуры вирусного S-белка имеет ряд потенциальных нюансов, и наиболее серьезным из них является антителозависимое усиление инфекции, как это было ранее показано для шиповидного белка SARS-CoV-1 группой китайских ученых [22].

Исходя из этого, нами был рассмотрен альтернативный подход, обеспечивающий развитие защитного иммунитета и исключающий возможность антителозависимого усиления инфекции. Мы использовали технологию синтетических пептидных вакцин. Эта